La electroforesis es una
técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo
eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por
tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.
La técnica clásica utiliza una
tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un electrolito. Sus
extremos se sumergen en dos depósitos independientes que contienen ambos al
electrolito y están unidos a los electrodos del generador de corriente. La
muestra se deposita en forma de un pequeño trazo transversal en la tira. La
distancia de migración se mide en relación un marcador interno. Las placas son
reveladas con sales de plata, azul de Coomassie, o reactivos en particular.
Fundamentos y Conceptos
Básicos
La electroforesis capilar (CE)
es una técnica de separación que se ha desarrollado gracias a los avances de la
cromatografía líquida de alta eficacia junto con los procedimientos más
tradicionales de electroforesis. Esta técnica permite separar bastante bien
biomoléculas, donde la cromatografía líquida se muestra menos eficaz, y
compuestos de pequeña masa molecular, difíciles de estudiar por los
procedimientos clásicos de electromigración en soporte.
La electroforesis capilar
constituye una adaptación particular de la técnica de electroforesis. Esta
técnica separativa se basa en la migración de las especies de la muestra en
disolución, portadoras de una carga eléctrica global, bajo el efecto de un
campo eléctrico y en contacto con un soporte (medio de desplazamiento)
adecuado.
En electroforesis capilar la
tira se reemplaza por un tubo capilar abierto en sus extremos, fabricado con un
diámetro pequeño (15 a 150μm). El capilar oscila entre 20 y 80cm, y está lleno
de una solución buffer. Un detector se encuentra ubicado en un extremo del
capilar, cerca del compartimiento catódico. La señal obtenida es la base de la
obtención del electroferograma, que muestra el registro de la
composición de la muestra. Solo las especies que se dirigen hacia el cátodo
serán detectadas.
Métodos de Detección
En la detección UV-Vis se mide
la intensidad de la luz que pasa a través del capilar en una pequeña zona en la
que se ha eliminado el revestimiento opaco.
La detección por fluorescencia
resulta más sensible si se emplea una fuente láser muy intensa, asociada a
menudo a un procedimiento de preformación de derivados de los analitos
portadores de un fluoróforo.
Bibliografia:
http://depa.pquim.unam.mx/amyd/archivero/Exposicion_electroforesis_5087.pdf
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